生物樣品儲(chǔ)存方法概述之冷凍保存

將需要冷凍的樣品冷凍（freezing,放于-20oC或-80oC）得當(dāng)能有效的保證樣品質(zhì)量！下面給大家安利幾種常見樣品的冷凍儲(chǔ)存方式：

DNA及緩沖液：對于基因組材料來說，收到輕微的機(jī)械剪切力不是什么大事情；對于不穩(wěn)定的緩沖液，如含有DTT的緩沖液，可直接冷凍儲(chǔ)存，無需調(diào)整。

蛋白：需要添加防凍劑用于蛋白的冷凍儲(chǔ)存。蔗糖或甘油是防凍劑很好的選擇，但對于不同的蛋白，蔗糖或甘油所占的百分比須有所不同。可選擇20％的蔗糖或10％的甘油。限制性內(nèi)切酶可以儲(chǔ)存在50％甘油中以保持穩(wěn)定性。由于較低的冷凍溫度，這種甘油的濃度可防止溶液完全凍結(jié)！

微生物（**，酵母和**）：10-20％甘油效果很好。更高的百分比（即更接近20％）使平板劃線更加容易。

高等真核細(xì)胞：常見的的冷凍過程為（僅供參考）：

1. 配制含10% DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；
2. 取對數(shù)生長期的細(xì)胞，用胰蛋白酶把單層生長的細(xì)胞消化下來，懸浮生長的細(xì)胞則直接將細(xì)胞移至15ml離心管中；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的*終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；
7. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
8．從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但*好為對數(shù)生長期細(xì)胞。在凍存前***好換一次培養(yǎng)液；
9．將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí)，要做好防護(hù)工作，以免**；
10．凍存和復(fù)蘇*好用新配制的培養(yǎng)液。

另外，反復(fù)凍融對樣品損害很大，因此將樣品分裝成小規(guī)格保存是不錯(cuò)的選擇。為了*大限度減少樣品浪費(fèi)，分裝之前需要知道樣品的濃度、后續(xù)實(shí)驗(yàn)每次的用量，以便分裝成適當(dāng)?shù)捏w積。小貼士：對于分裝成微小的體積，PCR條管是不錯(cuò)的選擇。

此外，一些大分子在儲(chǔ)存之前快速冷凍（flash-freezing）,能更好的保持功能。如何進(jìn)行快速冷凍：穿上實(shí)驗(yàn)室外套，戴上護(hù)目鏡、手套，將樣品放入含有少量液氮的杜瓦瓶（dewar）中，有泡沫和煙霧產(chǎn)生（此操作需要在通風(fēng)環(huán)境中進(jìn)行）。一旦停止產(chǎn)生泡沫，迅速將樣品取出，存儲(chǔ)在-20oC或-80oC。