小鼠骨髓基質(zhì)細胞
貨號 KL-009
簡稱 OP9
細胞數(shù) 1×106
規(guī)格 1ml/T25
價格 詢價
小鼠骨髓基質(zhì)細胞注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要**后方能丟棄。
詳細描述 Description
細胞介紹
OP9細胞株源自新生的op/op 小鼠顱蓋。因編碼M-CSF的基因中的一個突變，它不能生成有功能的巨噬細胞克隆刺激因子(M-CSF)。M-CSF的存在對胚胎干細胞(ES)分化成血細胞而不是其他巨噬細胞有抑制功能。 OP9細胞可以用于與小鼠胚胎干細胞共培養(yǎng)以誘導胚胎干細胞分化成成紅血球來源的、骨髓來源的和B細胞譜系的血細胞。與OP9共培養(yǎng)不需要外源的生長因子或復雜的胚胎結(jié)構(gòu)。這個系統(tǒng)對研究造血細胞的發(fā)育和分化的分子機理有用。
細胞特性
來源：骨髓，基質(zhì)
形態(tài)：成纖維細胞
含量：>1x106 個/mL
污染：支原體、**、酵母和**檢測為陰性
規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存：使用含有上等胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟：
一、小鼠骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；上等胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：小鼠骨髓基質(zhì)細胞如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1）棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3）按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4）將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：小鼠骨髓基質(zhì)細胞收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
4、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
