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產品詳情
  • 產品名稱:PA317(小鼠成纖維細胞)

  • 產品型號:PA317
  • 產品廠商:KALANG
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簡單介紹:
PA317(小鼠成纖維細胞)源自TK- NIH/3T3細胞,通過pBR322中的包裝結構DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉染構建而成。 通過感染或轉染將逆轉錄病毒載體導入這些細胞,結果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。 這株細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因導入人類。PA317(小鼠成纖維細胞) 可能因為用于構建這株細胞而轉入的DNA丟失,能夠包裝逆轉錄病毒載體的PA317細胞百分比隨傳代而減少。 在包含0.03 mM 次黃嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養基中短暫(大約5天)選擇,可以選出保留了包裝功能的細胞。 選擇后,細胞應在HT培養基(0.03 mM 次黃嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培養4天,以稀釋殘留的氨甲喋呤。
詳情介紹:

PA317(小鼠成纖維細胞)

細胞名稱:PA317     小鼠成纖維細胞

組織來源:胚胎

培養條件:DMEM +10% FBS

形       態:貼壁;成纖維細胞樣

背       景:PA317細胞株源自TK- NIH/3T3細胞,通過pBR322中的包裝結構DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉染構建而成。 通過感染或轉染將逆轉錄病毒載體導入這些細胞,結果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。 這株細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因導入人類。 可能因為用于構建這株細胞而轉入的DNA丟失,能夠包裝逆轉錄病毒載體的PA317細胞百分比隨傳代而減少。 在包含0.03 mM 次黃嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養基中短暫(大約5天)選擇,可以選出保留了包裝功能的細胞。 選擇后,細胞應在HT培養基(0.03 mM 次黃嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培養4天,以稀釋殘留的氨甲喋呤。

PA317(小鼠成纖維細胞)操作說明:

1)對于常溫運輸的細胞,收到細胞后,檢查是否有運輸問題,即細胞培養瓶或管是否破損,細胞培養液是否溢出。若沒有運輸問題,請75%酒精**后,保留封口膜,放入細胞培養箱中靜置。嚴格檢查培養箱的參數:溫度,濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后,細胞狀態穩定后,即可開始后續操作。選用正確的細胞培養體系,PA317(小鼠成纖維細胞)嚴格按照說明書的培養條件進行培養。條件允許,培養的前三天內做細胞拍照記錄,通過郵件發送給我們做及時狀態跟蹤。

2)對于干冰運輸的細胞,請取出冷凍管后,須立即放入37C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發生污染情形。然后將其復蘇培養,次日更換培養液。

PA317(小鼠成纖維細胞)注意事項:

1)細胞漂浮:培養瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以離心去掉,留10ml培養液培養觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養,中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。

2)對于生長緩慢的貼壁細胞:可采用適當的提高培養基中血清濃度,或隔日換液的方法來保證細胞的狀態和生長速度。

3)對于生長不均的貼壁細胞:在培養過程中若出現細胞分布明顯不均時(即某一區域細胞已重疊生長,而旁邊則為一塊空白),此時可將細胞進行消化,重新打散,貼壁,加入新培養基進行培養。 

PA317(小鼠成纖維細胞)下面介紹幾種細胞培養過程中常見的污染:

)桿菌污染:培養基中加入***可以減少此種污染,但也不是**的。

)支原體污染:傳說中的黑焦蟲,長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數情況下是培養用血清。

)***污染:似乎無處不在,而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細胞上面密布)。培養液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細胞上,高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。

)霉菌污染、比較常見的一種污染,常常來源于污染的空氣、水和器械。

 

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