CHO/dhFr-(倉鼠卵巢細胞(二氫葉酸還原酶缺陷))
細胞名稱：CHO/dhFr- 倉鼠卵巢細胞(二氫葉酸還原酶缺陷)
組織來源：正常卵巢
培養(yǎng)條件：IMDM+10% FBS+0.1mM次黃嘌呤+0.016mM胸腺嘧啶+200nM氨甲喋呤
形 態(tài)：貼壁；上皮細胞樣
背 景：該細胞為二氫葉酸還原酶缺陷細胞。在沒有HT（次黃嘌呤-胸腺嘧啶）時細胞會死亡。細胞培液中加氨甲喋呤可以防止對**低抗性的回變細胞的生長。
CHO/dhFr-(倉鼠卵巢細胞(二氫葉酸還原酶缺陷))操作說明：
1)對于常溫運輸?shù)募毎盏郊毎螅瑱z查是否有運輸問題，即細胞培養(yǎng)瓶或管是否破損，細胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒有運輸問題，請75%酒精**后，保留封口膜，放入細胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù)：溫度，濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后，細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，即可開始后續(xù)操作。選用正確的細胞培養(yǎng)體系，CHO/dhFr-(倉鼠卵巢細胞(二氫葉酸還原酶缺陷))嚴格按照說明書的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)。條件允許，培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細胞拍照記錄，通過郵件發(fā)送給我們做及時狀態(tài)跟蹤。
2)對于干冰運輸?shù)募毎埲〕隼鋬龉芎螅毩⒓捶湃?/span>37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。然后將其復蘇培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。
CHO/dhFr-(倉鼠卵巢細胞(二氫葉酸還原酶缺陷))注意事項：
1)細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。
2)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態(tài)和生長速度。
3)對于生長不均的貼壁細胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細胞分布明顯不均時（即某一區(qū)域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
CHO/dhFr-(倉鼠卵巢細胞(二氫葉酸還原酶缺陷))下面介紹幾種細胞培養(yǎng)過程中常見的污染：
一)桿菌污染：培養(yǎng)基中加入***可以減少此種污染，但也不是**的。
二)支原體污染：傳說中的黑焦蟲，長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數(shù)情況下是培養(yǎng)用血清。
三)***污染：似乎無處不在，而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細胞上面密布)。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細胞上，高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。
四)霉菌污染、比較常見的一種污染，常常來源于污染的空氣、水和器械。
