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為什么我的Elisa結果如此奇怪?

日期:2025-04-23 16:10
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摘要: 為什么我的Elisa結果如此奇怪? 分析全部顯一致色的可能原因就有這樣之多(可能還不全): 1 水質被金屬離子等污染;防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水 2 洗滌不充分,樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗滌液應注滿微孔,充分洗滌 3 移液頭重復使用,未洗凈或**不完全; 防止辦法移液頭*好一次性使用 4 酶標版太靈敏,我后期做試劑盒時曾經用過幾次進口的好的板子,結果那板子真好,忒好了,吸附性超強,全給我顯色,氣死了。連方陣都做不出來:-( 5 還有一...

為什么我的Elisa結果如此奇怪?

分析全部顯一致色的可能原因就有這樣之多(可能還不全):

1 水質被金屬離子等污染;防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水

2 洗滌不充分,樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗滌液應注滿微孔,充分洗滌

3 移液頭重復使用,未洗凈或**不完全; 防止辦法移液頭*好一次性使用

4 酶標版太靈敏,我后期做試劑盒時曾經用過幾次進口的好的板子,結果那板子真好,忒好了,吸附性超強,全給我顯色,氣死了。連方陣都做不出來:-(

5 還有一抗顯色時間的控制等等,關于ELISA的每一步都要注意才行啊。我也是硬從粗心的人變為細心了,沒辦法,要不是為了實驗啊。。。

從你說的情況看,你以前測IgG有良好的梯度,而現在測IgE梯度不明顯,它們的差別在于測IgG是用HRP標記的二抗,而測IgE用生物素標記的二抗。我覺得在排除你的ELISA操作不熟練出現問題的情況下,你可以考慮以下因素:

1、是否是生物素標記的二抗有問題?是進口貨還是國產貨?檢驗生物素標記的二抗有無問題,可以將二抗稀釋成不同濃度,然后用底物使之顯色,簡單的說就是給二抗做個方陣,看看它的顯色及靈敏度;

2、你一抗稀釋的*大倍數是多少倍?你做方陣時,可以把一抗稀釋的梯度拉大一些,如果現在做到20萬倍稀釋,還可以繼續往下,比如40萬、80萬、160萬……因為如果一抗的濃度非常大,效價很高的話,那么肯定是需要稀釋到很大的一個倍數后顯色才會有明顯梯度出現。

3、你的空白孔有沒有包被抗原?如果包被抗原了,但結果不顯色則說明你的包被封閉等操作都沒問題;如果沒有包被抗原直接封閉的,*后不顯色,那說明二抗沒有什么非特異性吸附。

4、我還想問一下,陰性對照如何?也顯色嗎?如果陰性對照也顯色,那抗原的用量可能比較大了,再往下稀釋。

此外,洗板子也要注意,盡量勿加滿孔,小心串孔。沒有洗板機不是問題,我做了3年ELISA,也沒有洗板機,還不是都拍過來了,呵呵。


滬公網安備 31011702004399號

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