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ELISA陰性值偏高是什么原因

日期:2025-04-25 20:34
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摘要: ELISA陰性值偏高是什么原因 你的空白值是多少呢?如果空白值也是0.1那可能是有非特異性吸附.你可以嘗試不包被抗原,直接封板子加二抗,看看還顯不顯色,有時(shí)二抗會(huì)有非特異性吸附的.如果是非特異性吸附,可以用封閉液來(lái)稀釋一抗和陰性,這樣可以起到封閉非特異性吸附的作用。 ELISA顯色深淺除了和抗原抗體特異性結(jié)合有關(guān)外,還和酶標(biāo)板的物理吸附能力有很大的關(guān)系。還有一點(diǎn)就是象棋篩子說(shuō)的,陰性稀釋倍數(shù)大了也有可能會(huì)顯色,陰性稀釋倍數(shù)與一抗的稀釋倍數(shù)*好相同,這樣才有可比性。 我的程序: ...

ELISA陰性值偏高是什么原因

你的空白值是多少呢?如果空白值也是0.1那可能是有非特異性吸附.你可以嘗試不包被抗原,直接封板子加二抗,看看還顯不顯色,有時(shí)二抗會(huì)有非特異性吸附的.如果是非特異性吸附,可以用封閉液來(lái)稀釋一抗和陰性,這樣可以起到封閉非特異性吸附的作用。

ELISA顯色深淺除了和抗原抗體特異性結(jié)合有關(guān)外,還和酶標(biāo)板的物理吸附能力有很大的關(guān)系。還有一點(diǎn)就是象棋篩子說(shuō)的,陰性稀釋倍數(shù)大了也有可能會(huì)顯色,陰性稀釋倍數(shù)與一抗的稀釋倍數(shù)*好相同,這樣才有可比性。

我的程序:

4度包被過(guò)夜—PBST洗2-3遍

—加封閉液,37度1小時(shí)——洗2-3遍

——加血清,PBS稀釋血清,37度2h——洗5遍

——加二抗,37度1h——洗5遍

——OPD顯色

陰性孔沒(méi)加血清,PBS代替,其他和樣品孔相同。

個(gè)人認(rèn)為造成陰性值偏高的主要原因有以下幾種可能:

1 陰性標(biāo)本污染,趕緊換一批標(biāo)本

2 ELISA系統(tǒng)問(wèn)題:a 顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng),盡量保持每一次顯色時(shí)間一致

b 二抗的非特詣性吸附,所以每次可做二抗測(cè)試

3 硬件問(wèn)題---酶標(biāo)板,國(guó)外吸附性太強(qiáng),國(guó)內(nèi)的批間差詣等等


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